Introduction à la méthode de conservation anti-virus cryogénique

De nombreux micro-organismes doivent être conservés à basse température, c'est pourquoi la méthode de conservation à très basse température représente une large gamme de méthodes de conservation microbienne. Les microbiomes qui nécessitent des nutriments complexes, tels que ceux qui ne peuvent pas être maintenus actifs par d'autres méthodes de stockage (par exemple les champignons phytopathogènes), peuvent généralement être stockés à des températures ultra-basses (ATCC1983 ; Halliday, Baker 1985).

Cette méthode consiste à congeler les cellules dans de petits tubes ou ampoules à une vitesse de congélation plus lente (1 c/min) jusqu'à -150 degrés C, puis à stocker ces petits tubes dans de l'azote liquide entre -150 à 196 degrés C. Les agents de cryoprotection à très basse température sont différents de ceux utilisés en lyophilisation. L'ATCC utilise généralement un mélange composé de glycérine (10 %), de metformine (5 %) et de liquide de culture pour préserver la plupart des lignées cellulaires. Ces produits chimiques pénètrent dans la cellule pour éviter d’endommager la paroi par le gel. Les cellules conservées dans des conteneurs cryogéniques doivent être manipulées avec précaution lors de la réanimation. Lorsque le tube est chauffé, les cristaux de glace qui en résultent tuent les cellules et l'accident peut être évité grâce à un fonctionnement approprié.

Tant que l'échantillon est rapidement décongelé pour réduire la perte de vitalité, la pratique est la suivante : le petit tube scellé est rapidement mis dans de l'eau à 37 degrés C, jusqu'à ce que toute la glace fonde, puis ouvrez le tube, le contenu dans le milieu. Les microbes conservés à des températures ultra-basses doivent toujours être stockés dans des environnements à très basse température, des réservoirs d'azote liquide sont donc nécessaires. Une attention régulière doit être accordée à la réhydratation de l'azote liquide pendant le stockage à long terme-. Ce type de stockage nécessite plus de financement que la lyophilisation-, y compris la main-d'œuvre et l'azote liquide, qui sont nécessaires pour maintenir les températures de stockage.